中华东说念主民共和国国度表率

GB 31614.1-2023

食物安天下度表率食物中唾液酸的测定

绪论

本表率代替GB/T 30636-2014《燕窝偏激成品中唾液酸的测定液相色谱法》。

本表率与GB/T 30636-2014比拟，主要变化如下：

——修改了表率称呼；

——修改了依次的适用鸿沟，加多了液态乳、乳粉、糕点、饮料；

——明确了燕窝偏激成品中测定的指标物资为蚁合态唾液酸；

——加多了液相色谱-荧光检测法和液相色谱-质谱/质谱法。

1鸿沟

本表率律例了食物中唾液酸的测定依次。

本表率第一法液相色谱紫外检测法适用于燕窝偏激成品中蚁合态唾液酸的测定，第二法液相色谱荧光检测法和第三法液相色谱质谱/质谱法适用于液态乳、乳粉、糕点、饮料中唾液酸的测定。

第一法液相色谱-紫外检测法

2旨趣

样品在盐酸溶液中加滚水解，开释出蚁合态唾液酸，样品试液用强阴离子交换色谱柱分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量。

3试剂和材料

除非另有施展，本依次所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682律例的一级水。

3.1试剂及材料

3.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。

3.1.2磷酸（H3PO4）：色谱纯。

3.1.3浓盐酸（HCl）：12 mol/L。

3.1.4透析袋：可透过相对分子质料7 000以下的化合物，临用前用水浸泡1 h。

3.1.5微孔滤膜：0.45 μm，有机相型。

3.2试剂配制

3.2.1盐酸溶液（0.05 mol/L）：吸取4.17 mL浓盐酸，溶于水并稀释至1 000 mL。

3.2.2 0.1%磷酸溶液：吸取 1 mL磷酸，溶于水并稀释至1 000 mL。

3.2.3 0.1 %磷酸溶液-乙腈（4+6）：将0.1%磷酸溶液和乙腈按4：6的体积比羼杂均匀。

3.3表率品

唾液酸（N-乙酰神经氨酸，C11H19NO9，CAS号131-48-6）：纯度≥96%，或经国度认证授予表率物资文凭的表率品。

3.4表率溶液配制

3.4.1唾液酸表率储备液（1000mg/L）：准确称取适量唾液酸表率品（按纯度进行折算），用水熔化并配制成质料浓度为1 000 mg/L的表率储备溶液，于4℃下避光保存，保存期6个月。

3.4.2唾液酸表率系列使命液：分散吸取唾液酸表率储备液（1 000 mg/L）0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL、5.0 mL、10.0 mL和20.0mL于100 mL容量瓶中，加入0.1%磷酸溶液-乙腈（4 +6）定容至刻度，混匀。唾液酸表率系列使命液的质料浓度分散为1.0 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L、50.0 mg/L、100.0 mg/L和200.0 mg/L，临用现配。

4仪器和树立

4.1液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。

4.2恒温水浴锅。

4.3涡旋羼杂器。

4.4分析天平：感量为0.1 mg和0.01 g。

4.5匀浆机：转速不低于 10 000 r/min。

4.6烘箱。

4.7高速离心理。

4.8筛网：筛网孔径 0.150 mm。

4.9研钵。

5分析才调

5.1样品前惩处

5.1.1试样制备

5.1.1.1燕窝（盏、条、碎等）和固态燕窝成品

称取10 g燕窝、固态燕窝成品在101℃~105℃烘箱中烘千至恒重（两次质料差不越过2 mg），在干燥器中冷却后研磨，一齐过100 目筛（筛网孔径0.150 mm）后装入洁净容器，放于干燥器内，密闭备用。

5.1.1.2液态燕窝成品

液态燕窝成品混匀后取200 g，先低速匀浆，再缓缓升至转速10 000 r/min，匀浆3 min，静置至泡沫摒除，装入洁净容器，密闭避光，冷藏保存。

5.1.2 试样索求

5.1.2.1 燕窝（盏、条、碎等）和固态燕窝成品

唾液酸总量的测定：称取0.1 g（精准至0.000 1 g）样品于25 mL具塞比色管中，加入10 mL盐酸溶液，盖上玻璃塞，涡旋混匀，置于80℃水浴中水解40 min，在水浴经由中每5 min飘扬一次，取出离心管，冷却至室温。将水解液退换至100 mL容量瓶，用适量水洗涤离心管两次并退换至容量瓶中，用0.1%磷酸溶液-乙腈（4+6）定容至刻度，混匀。移取2 mL于离心管中，15000 r/min离心3 min，取上清液过0.45μm微孔滤膜后，待测。

游离态唾液酸含量的测定：称取0.1 g（精准至0.000 1 g）样品于25 mL具塞比色管中，加入10 mL水，涡旋飘扬3 min，将试样溶液退换至100 mL容量瓶中，用适量水洗涤离心管两次并退换至容量瓶中，用0.1%磷酸溶液-乙腈（4+6）定容至刻度，混匀。移取2 mL于离心管中，15000 r/min离心3 min，取.上清液过0.45 μm微孔滤膜后，待测。

5.1.2.2液态燕窝成品.

蚁合态唾液酸含量的测定：称取10g（精准至0.01g）样品置于透析袋中（试样体积不越过透析袋容积的20%），扎紧透析袋两头，置于1 000 mL烧杯中在流动的自来水下透析24 h。透析后，将此透析袋中的试液退换至25 mL具塞比色管中，加一丝水冲洗透析袋，吞并至比色管中，加入104 μL浓盐酸，加水定容至25 mL，混匀，使水解液中盐酸的质料浓度为0.05 mol/L。盖上玻璃塞，置于80℃水浴中水解40 min，取出比色管，冷却至室温。将水解液退换至100 mL容量瓶中，用适量水洗涤比色管两次并退换至容量瓶中，用0.1%磷酸溶液-乙腈（4+6）定容至刻度，混匀。移取2 mL于离心管中，15 000 r/min离心3 min，取上清液过0.45 μm微孔滤膜后，待测。

5.2 液相色谱参考条目

液相色谱参考条目如下：

a）色谱柱：SAX强阴离子交换柱，250 mm×4.6 mm（内径），5μm，或相等者。

b）柱温：30℃。

c）检测波长：205 nm。

d）流动相：0.1 %磷酸溶液-乙腈（40+60，体积比）。

e）流速：1.0 mL/min。

f）进样量：10μL。

5.3表率弧线的制作

将表率系列使命液分散注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以表率系列使命液中唾液酸的质料浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，画图表率弧线。唾液酸表率溶液的色谱图参见附录A中图A.1。

5.4试样溶液的测定

将试样溶液注入液相色谱仪中，得到峰面积，左证表率弧线得到待测液中唾液酸的质料浓度。表率使命液和待测样液中唾液酸的反应值均应在仪器线性反应鸿沟内。若是含量越过表率弧线线性鸿沟，需疗养称样量或定容体积从头检测。

6分析效果的表述

试样中蚁合态唾液酸的含量按式（1）蓄意。

式中：

X——试样中唾液酸的含量，单元为克每千克（g/kg）；

ρ——由表率弧线得到的试样溶液中唾液酸的质料浓度，单元为毫克每升（mg/L）；

V——试样的定容体积，单元为毫升（mL）；

m——试样的取样量，单元为克（g）；

1000——换算扫数。

蓄意效果需扣除空缺值，保留3位有用数字。

关于燕窝和固态燕窝成品，分散测定唾液酸总量和游离态唾液酸含量，蚁合态唾液酸含量由唾液酸总量减去游离态唾液酸含量蓄意得到。

7精密度

在重叠性条目下获取的两次独处测定效果的齐备差值不得越过算术平均值的10%。

8其他

燕窝和固态燕窝成品，当称样量为0.1 g时，检出限为0.3 g/kg，定量限为1.0 g/kg；液态燕窝成品，当称样量为10 g时，检出限为0.003 g/kg，定量限为0.01 g/kg。

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